Научная электронная библиотека

Монографии, изданные в издательстве Российской Академии Естествознания

ДИАГНОСТИКА И ПРОФИЛАКТИКА ЗАБОЛЕВАНИЙ ЗАВИСИМОСТИ

Морозова В. С., Габрильянц О. А., Мягкова М. А.,

Глава 6. МЕТОД ИММУНОФЕРМЕНТНОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ МЕТАБОЛИТОВ НАРКОТИЧЕСКИХ ВЕЩЕСТВ В МОЧЕ «ДИАНАРК-М»

Среди скрининговых методов выявления наркотических веществ наиболее распространены методы анализа по моче. Это связано с доступностью больших количеств данного биоматериала, концентрированием наркотических веществ в моче (их большей концентрацией в этом биообъекте по сравнением с другими биожидкостями). Наиболее известен метод ИХА по моче, однако в наркологических и судебно-медицинских учреждениях часто требуется использование инструментального метода для скрининга наркотических веществ. Инструментальные методы более надежны с точки зрения точности процедуры проведения анализа и интерпретации результатов.

Наряду с поляризационным флуоресцентным иммуноанализом, многие лаборатории используют метод ИФА метаболитов наркотических веществ в моче. Данный метод может быть как количественным, так и качественным. Последний вариант чаще используется в наркологической практике, т.к. метод ИФА является предварительным, и, следовательно, необходимо получение лишь качественного результата: содержит данный образец метаболиты наркотического вещества или нет.

В ИФАВ РАН были разработаны количественные методики ИФА наркотических веществ в моче еще в конце 80-х гг. прошлого столетия. Впервые была разработана схема непрямого конкурентного ИФА для анализа метаболитов наркотических веществ (рис. 38). Данная схема отличается высокой чувствительностью выявления следов метаболитов наркотических веществ (на уровне пг/мл). В настоящее время в наборах реагентов «Дианарк-М» используется этот же формат ИФА, однако, в соответствии с требованиями медучреждений, выпускаются тест-системы с качественной оценкой результата.

Непрямой конкурентный формат ИФА, используемый в тест-системах «Дианарк-М», включает следующие стадии:

1) нанесение анализируемых и контрольных образцовна полистирольный планшет с сорбированным на нем антигеном;

2) нанесение специфических антител к данной группе ПАВ;

3) инкубация и отмывка несвязавшихся компонентов;

4) добавление антивидовых антител, меченых пероксидазой хрена;

5) инкубация и отмывка несвязавшихся компонентов;

6) выявление образовавшихся иммунных комплексов путем добавления субстрата, т.е. проведение ферментативной реакции;

7) «остановка» ферментативной реакции с помощью «стоп-реагента» – раствора серной кислоты;

8) измерение оптической плотности (ОП при 450 нм) на спектрофотометре с вертикальным лучом;

9) учет результатов.

Рис. 38. Схема непрямого конкурентного ИФА

Проведение иммуноферментного анализа считается правильным, если среднее значение ОП в двух лунках с отрицательным контрольным образцом превышает среднее значение ОП в двух лунках, содержащих положительный контрольный образец, не менее,
чем на 0,2.

Образцы, которые дают среднее значение ОП в двух лунках равное или меньшее, чем среднее значение ОП в двух лунках положительного контрольного образца, являются положительными, т.е. содержат вещество данного класса ПАВ.

Наборы реагентов «Дианарк-М» предназначены для определения следующих основных групп наркотических веществ: опиаты, каннабиноиды, амфетамины/метамфетамины и барбитураты. Пределы обнаружения тест-систем соответствуют Европейским аналитическим стандартам и приведены в табл. 12.

Таблица 12

Пределы обнаружения метаболитов наркотических веществ в моче (тест-системы «Дианарк-М»)

В соответствии с областями применения определения метаболитов наркотических веществ в моче, диагностические наборы «Дианарк-М» имеют следующие сферы использования:

● диагностика наркомании средних и тяжелый стадий;

● тестирование работников опасных профессий перед сменой;

● предрейсовые осмотры;

● судебная медицина.